Protocolos

PROTOCOLOS

Protocolos para utilização dos equipamentos

PROTOCOLO PARA UTILIZAÇÃO DO DICROÍSMO CIRCULAR (CD) – ICB-UFMG

  1. Ligar o computador.
  2. Ligar o fluxo, o CD e o controle de temperatura, nessa ordem (da esquerda pra direita).
  3. Esperar estabilizar a temperatura (aproximadamente 20ºC).
  4. Abrir o gás (primeiro abre a válvula maior e depois a menor). A válvula menor deve ser aberta até chegar em 2.
  5. Abrir o controle de vazão até aproximadamente 20. Se já tiver em 20 não precisa mexer. (o controle de vazão fica à esquerda do CD)
  6. Abrir o programa no computador: Spectra Manager.
  7. Clicar em Spectra Manager -> File -> Open Parameters para abrir um parâmetro já existente.
  8. Para criar um parâmetro, clicar em: Measure -> Parameters]
    . Chanel nº1
    . Start 260/190 nm
    . Data Pitch 0,5 mm
    . Acumulation 5
    . Control -> Shutter (deve estar marcado)
    . Information (colocar nome da amostra)
  9. Monitorar a linha de base: Measure -> baseline -> measure
  10. Para a análise das amostras: measure -> parameters -> mudar nome -> measure-> sample
  11. Salvar os resultados em uma pasta.
  12. Para desligar o equipamento: Fechar o gás (válvula menor -> válvula maior) -> desligar o controle de temperatura, o CD e o fluxo -> desligar o computador.

Observações:

* Lavar a cubeta após cada análise
* O espaçador deve ficar na frente da cubeta e a amostra deve ocupar todo o espaço do círculo do espaçador.
* As amostras devem ser: Branco de peptídeo, Branco de DPC, Branco de peptídeo em tampão, Branco de PC:PG em tampão, Peptídeo + PC:PG (em diferentes concentrações), Peptídeo + DPC (em diferentes concentrações).

Tratamento de dados

  1. Spectra -> Analysis -> File -> Open
  2. File -> Overlay -> abrir resultado
  3. Processing -> Substract
  4. Processing -> CD options -> optical constant

MALDI TOF

As amostras apresentam algum risco à saúde? ( )Não ( )Sim, qual:___________________________
( ) modo positivo ( ) modo negativo
( ) Determinar massa molecular
( ) Fragmentação ( )Todas as amostras ( ) Amostras: ____________________
( ) Identificação proteína digerida
Enviar resultado em formato: ( )txt ( )Imagem ( )Outros________________________
Observações:_